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細胞培養基的操作規程

更新時間:2021-08-20

閱讀:1705

   細胞培養基既是培養細胞中供給細胞營養和促使細胞生殖增殖的基礎物質,也是培養細胞生長和繁殖的生存環境。
  細胞培養基的操作規程:
  一、復蘇
  1.把凍存管從液氮中取出來,當即投入37℃水浴鍋中,輕微搖晃。液體都融化后(大約1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到超凈工作臺里。
  2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培育基的15ml的離心管中(用培育基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。
  3.把上清液倒掉,加1ml培育基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培育基的10cm培育皿中前后左右輕輕搖晃,使培育皿中的細胞均勻分布。
  4.標好細胞品種和日期、培育人姓名等,放到CO2培育箱中培育,細胞貼壁后換培育基。
  5.3天換一次培育基。
  二、傳代
  1.培育皿中的細胞覆蓋率到達80%-90%時要傳代。
  2.把原有培育基吸掉。
  3.加恰當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。
  4.細胞都變圓后加如入等體積的含血清的培育基終止消化。
  5.用移液槍吹打細胞,把細胞都懸浮起來。
  6.把細胞吸到15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。
  7.倒掉上清液,加1-2ml培育基,把細胞都吹起來。
  8.依據細胞品種把細胞傳到幾個培育皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個,繼續培育。
  三、凍存
  把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,中止幾分鐘,寫明細胞品種,凍存日期4℃30min,-20℃30min,-80℃過夜,然后放到液氮灌中保存。
  以上為您介紹的是細胞培養基的操作規程,以上知識希望對您有所幫助!
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